B.3.3 處理效果檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟

B.3.3.1 按實(shí)際使用情況，在消毒室內(nèi)模擬擺放常規(guī)處理的醫(yī)療廢物至使用說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的最高裝載量（滿載）。將枯草桿菌黑色變種芽孢（B.subtilis var.niger ATCC 9372）或嗜熱脂肪桿菌芽孢（B.stearothermophilus ATCC 7953）菌片放入消毒袋內(nèi)，然后置于消毒倉(cāng)室各層4個(gè)角、中央的醫(yī)療廢物中間和消毒倉(cāng)室最難消毒的部位。放入試驗(yàn)菌片前，按設(shè)備使用說(shuō)明書(shū)要求的方法做預(yù)濕處理。

B.3.3.2 菌片布放完畢后，關(guān)閉消毒倉(cāng)室門(mén)，按設(shè)備使用說(shuō)明書(shū)的消毒程序進(jìn)行消毒試驗(yàn)。消毒或消毒完畢后，打開(kāi)消毒倉(cāng)室門(mén)，以無(wú)菌操作方式試驗(yàn)菌片。

B.3.3.3 將試驗(yàn)菌片分別加到裝有5mL洗脫液的試管中，用手振蕩200次，做10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度，分別吸取1mL，以傾注法接種于兩個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，即為實(shí)驗(yàn)組。

B.3.3.4 試驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組（菌片對(duì)照）與陰性對(duì)照組（培養(yǎng)基對(duì)照）。陽(yáng)性對(duì)照組：將同批試驗(yàn)用的菌片放在室溫下，待實(shí)驗(yàn)組達(dá)到規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別移入含5.0mL洗脫液的2個(gè)試管中，用手各振蕩200下，其余步驟與實(shí)驗(yàn)組相同。陰性對(duì)照組：分別取1mL所用洗脫液放于平皿內(nèi)，加入15mL-20mL培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱48h，觀察有無(wú)污染。試驗(yàn)重復(fù)3次。

B.3.4 殺滅對(duì)數(shù)值的計(jì)算方法

首先計(jì)算各組的活菌數(shù)（cfu/片），并換算為對(duì)數(shù)值（N），然后按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：殺滅對(duì)數(shù)值（KL）＝No－NxNo為對(duì)照組平均活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值；Nx為實(shí)驗(yàn)組活菌數(shù)對(duì)數(shù)值。

B.3.5 消毒效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

在3次消毒實(shí)驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽(yáng)性對(duì)照菌片回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105-5×106cfu/片，陰性對(duì)照組應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，每次試驗(yàn)各點(diǎn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥4.00，可判為消毒合格。

B.4 醫(yī)療廢物高溫干熱消毒處理效果微生物檢測(cè)程序和方法

B.4.1 試劑和材料

生物指示劑：枯草桿菌黑色變種芽孢（B.subtilis var.niger ATCC 9372）。

B.4.2 儀器和設(shè)備

與生物指示劑相匹配的生物培養(yǎng)器。

B.4.3 樣品

選擇國(guó)際通用的高溫干熱消毒用生物內(nèi)含式生物指示劑，枯草桿菌黑色變種芽孢（B.subtilis var.niger ATCC 9372），含菌量為5×105-5×106cfu/片。

B.4.4 分析步驟

B.4.4.1 將多個(gè)生物指示劑菌管隨同醫(yī)療廢物，放置于殺菌室內(nèi)蒸汽處理效果最難保證的空間位置，或?qū)⒕芊胖迷诎b盒內(nèi)并裹挾進(jìn)醫(yī)療廢物中，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的滅菌參數(shù)下，進(jìn)行消毒處理。

B.4.4.2 消毒處理完畢后，取出指示菌劑，捏碎玻璃管，按照產(chǎn)品規(guī)定的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)（如無(wú)特殊說(shuō)明，培養(yǎng)溫度為56℃，培養(yǎng)時(shí)間為48h），同時(shí)以沒(méi)有經(jīng)歷消毒處理的生物指示劑菌管做對(duì)照，并觀察培養(yǎng)基顏色變化。

試驗(yàn)重復(fù)3次。

B.4.5 消毒效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

以經(jīng)過(guò)消毒的陰性菌管與陽(yáng)性對(duì)照菌管的顏色變化相同與否判斷是否到達(dá)消毒效果要求，陰陽(yáng)菌管顏色變化相同或都不發(fā)生變化，說(shuō)明消毒不合格；顏色變化不同，說(shuō)明消毒合格。

B.4.6 精密度和準(zhǔn)確度

活菌計(jì)數(shù)因技術(shù)操作而引起的菌落數(shù)誤差率（平板間、稀釋度間）不超過(guò)10%。

B.4.7 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

在3次試驗(yàn)中，對(duì)照組細(xì)菌芽孢數(shù)量應(yīng)在5×105-5×106cfu/g以上，陰性對(duì)照組均無(wú)菌生長(zhǎng)，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果可用。

編輯：趙凡